ביוטכנולוגיה

סיכום שיעור 7

גילת שץ

גילת שץ

פרטי הסיכום

קורס: ביוטכנולוגיה

מספר השיעור: 7

סיכום השיעור

קורס ביוטכנולוגיה, 132394

סיכום שיעור 7

18.02.2021

דנ”א רקומביננטי  הוא מולקולת DNA שנוצרה באופן טבעי או תוכננה במעבדה – כתוצאה מצירוף (קומבינציה) מחדש (רה) של מקטעי DNA ממקורות שונים, לרוב ממינים שונים של אורגניזמים.

יצור של דנ”א רקומביננטי דורש וקטור שיבוט, מולקולת דנ”א אשר משתכפלת בתוך תא חי. וקטורים לרוב נגזרים מפלסמידים או מוירוסים, ומייצגים יחסית חלק קטן של דנ”א הכולל אותות נחוצים לשכפול גנטי, כמו גם אלמנטים נוספים המאפשרים החדרת דנ”א זר.

בפרוטוקולים סטנדרטיים של שיבוט, השיבוט של כל קטע דנ”א כרוך בשבעה צעדים:

  • בחירה של יצור מארח ווקטור שיבוט
  • הכנת וקטור הדנ”א
  • הכנת הדנ”א למצב של שיבוט
  • יצירת דנ”א רקומביננטי
  • הצגה של הדנ”א הרקומביננטי לייצור המארח
  • בחירה של יצורים המכילים דנ”א רקומביננטי
  • סריקת השיבוטים עם ה-דנ”א הרצוי והמאפיינים ביולוגיים.

לאחר השתלה לתוך האורגניזם המארח, הדנ”א הזר המוכל בתוך ה-DNA הרקומביננטי עשוי או עשוי שלא, לבוא לידי ביטוי. ייתכן כי הדנ”א פשוט ישוכפל ללא ביטוי, או שהוא יעובד ויתורגם כך שהחלבון הרקומביננטי ייווצר. באופן כללי, ביטוי של גן זר דורש בנייה מחדש של הגן, כך שיכלול רצפים הדרושים לייצור מולקולת mRNA היכולה להיות בשימוש על ידי מנגנון התרגום של המארח.

פלסמיד: מקטע DNA דו-גדילי מעגלי שאינו חלק מה-DNA הכרומוזומלי. נפוץ מאוד בחיידקים.

למה שנרצה לבודד פלסמידים? אחת הדרכים לבטא גן מסויים בכמות עצומה היא להחדירו אל פלסמיד של חיידק מסויים ולתת לאותו חיידק להתרבות. לאחר מכן, נוכל להשתמש באחת השיטות lysis Alkaline או lysis Boiling על מנת לבודד את הפלסמידים בלבד, וקיבלנו את הגן שרצינו בהמון עותקים.

ניקוי חלבונים

כרומטוגרפיית גודל המולקולה– מולקולות בגדלים שונים יצאו בנפחי אילוציה שונים. ככל שהחלקיק גדול יותר כך הנפח בו הוא יוכל לנוע בתוך הקולונה קטן יותר ולכן חלקיק גדול יצא בנפח אילוציה קטן יותר.

כרומטוגרפיית זיקה לפיכך כדי לבודד חלבון מסוים על ידי קולונת אפיניות צריך להכיר את החלבון אותו מבקשים לבודד. לפי הידע המוקדם יודעים לקשור בצורה קוולנטית, אל החרוזים מולקולה אליה לחלבון המטרה אפיניות גבוהה.

כרומטוגרפיית חילוף יונים או הפרדה לפי מטעןשיטה זו, הידועה יותר כIEC  הפרדה זו מתבססת על כך שלחלבונים מספר גדול של קבוצות פונקציונליות טעונות (חיובית או שלילית) כתלות בחומציות התמיסה בה הם נמצאים. IEC מפרידה בין חלבונים על סמך המטען הכללי על שרשרת הפפטיד, כאשר המטען תלוי בחומציות הפזה הניידת.

שחרור המולקולות נעשה על ידי הוספה של גורמים תחרותיים כגון מלחים.

 

עריכת הסיכום

iw עִבְרִית
X