ביוטכנולוגיה

סיכום שיעור 14

Shuli

Shuli

פרטי הסיכום

קורס: ביוטכנולוגיה

מספר השיעור: 14

סיכום השיעור

סיכום שיעור 14 בביוטכנולוגיה

מאת: שולמית איזמן 039857040

המשך שיטות לאנליזת רנ”א/ דנ”א

FISH– פותחים דנ”א דו גדילי לשני גדילים ומשלימים עם רצף מסומן פלורוסנטית. אך לא ניתן לדעת את הרצף המדויק או רמות ביטוי רק אם יש היברידיזציה או לא.

שימושים- IVF, PGD אבחון טרום לידתי לעובר שבו אפשר לראות טרנסלוקציות וטריזומיות.

שחבור אלטרנטיבי- מספר הגנים באדם הוא קטן אבל בעזרת שחבור של קומבינציות שונות של אקסונים אפשר ליצור מגן אחד הרבה חלבונים.

PCR– שיטה בסיסית שניתן לבצע על כמויות קטנות או על התא עצמו שיטה מהירה ופשוטה.

חסרונות- צריך לדעת את רצף גבולות המקטע המוגבר, אורך התוצר מוגבל ותלוי אנזים שנבחר, טעויות בהכפלה וקבלת מוטציות. הפרדת התוצרים מתבצעת בג’ל אלקטרופורזה.

Real time PCR – כמו השיטה הקודמת רק שבכל מחזור של PCR בודקים את רמות התוצר באמצעות סמן פלורוסנטי. וכל התוצאות הן יחסיות.

סמנים- SYBR GREEN -סמן לא ספציפי או TAQMAN – שהוא סמן ספציפי.

עשינו חזרה בשיעור על השיטות: Digital Drop PCR, microarray, Deep sequencing

ריצוף בשיטת סנגר– סימון כל נוקלאוטיד בסמן פלורוסנטי אחר ואז עוצרים את ריאקצית הPCR כל פעם בזמן אחר מריצים את התוצרים על ג’ל ומקבלים הפרדה על פי הגדלים מרצפים ומקבלים את כל הרצף של הגן.

ILLUMINA– בשיטה זאת ניתן לרצף דנ”א גנומי, small RNA, mRNA. עקרון השיטה כמו שהסברנו בNGS בשיעור מספר 13.

Ion torrent– הנוקלאוטידים לא מסומנים אבל בכל פעם שנוסיף נוקלאוטיד יש קריאה באמצעות פעימה חשמלית. שיטה נוספת שעובדת על עקרון של פעימה חשמלית היא NANOPORE.

חזרה על שיטת Nanostring

ריצוף בשיטת התא הבודד בעזרת פלואידיקה שומנית יוצרים בועיות כאשר כל בועית מכילה תא אחד. יצירת ספריה של גנים שמסומנים עם ברקוד שאומר מאיזה תא מקור הם הגיעו ואז עושים ריצוף בשיטת אילומינה. בשיטה זאת ניתן לעשות גם אנאליזה לחלבונים וגם לmRNA.

עריכת הסיכום

iw עִבְרִית
X