ביוטכנולוגיה

סיכום שיעור 11

רחל לוי

רחל לוי

פרטי הסיכום

קורס: ביוטכנולוגיה

מספר השיעור: 11

סיכום השיעור

סיכום פגישה 11 ביוטכנולוגיה

PCR– שיטות להגברת DNA: לא מגבירים את כל ה-DNA, אלא רק מקטע ספציפי אותו בוחרים מראש כי משתמשים בזוג פריימרים שהם מתאימים לאזור שרוצים להגביר. מרכיבי התגובה הם: תבנית DNA דו גדילי, זוג פריימרים, נוקלאוטידים (אבני הבניין של ה-DNA), האנזים DNA polymerase ובופר .כל פריימר נקשר לגדיל אחר ובכך מגדיר את מקטע ההגברה. הכפלת DNA מתבצעת על ידי הפרדת הגדילים, התחברות אנזים ה- DNA polymearase לאחד הגדילים באזור ההפרדה על הפריימר וסנתיזה של ה-DNA. ה-PCR חוזר על השלבים עשרות פעמים ובכך מכפיל את כמות ה-DNA פי שתיים בכל שלב, כלומר 30 שלבים יצרו מעל מליארד עותקים מ-2 עותקים. יש 3  שלבים במחזור כל שלב עם טמפרטורת עבודה שונה. הריאקציה היא: דנטורציה ,אנילינג , אלונגציה . שלב הדנטרציה מתבצע ב-95 מעלות, ובמהלכו שני גדילי ה-DNA נפרדים. שלב זה אורך כחצי דקה. בשלב האנילינג, מתאחים שני הפריימרים על הגדילים המנוגדים. שלב זה מתבצע בטמרטורה של בין 45-70 מעלות וזה תלוי באורך והרכב הפריימרים. בשלב האלונגציה, נקשר ה-DNA polymerase אל הפריימרים ומתחיל לסנתז DNA. אחרי המחזור הראשון, מקבלים כמות כפולה של מולקולי DNA לא שלמות כלומר מסונתזות החל מהפריימר שנקשר אליהן.אחרי  המחזור השני נקבל כבר ארבע מולקולות מתוכן אחת מכילה רק את המקטע הרצוי. בתום השלב השלישי, כבר יהיה לנו שמונה מולקולות DNA מתוכן ארבע מכילות רק את המקטע הרצוי. בתום השלב הרביעי יהיו לנו 16 מולקולות DNA מתוכן 8 מכילות את המקטע הרצוי וכך כמות ה-DNA רק עם המקטע הרצוי יגדל באופן לוגריטמי (מעריכי).בתום התגובה, מספר מולוקולות המכילות שאריות מה-DNA המקורי שאינו במקטע הנבחר יהיה כל כך נמוך ביחס לשאר, שזה יהיה זניח, וזאת משום שקצב הריבוי שלהם הינו קצב ישר (לינארי) אם יש 30 שלבים, יהיו 60 מולקולות ביחס ליותר ממליארד המולוקולת של המקטע.

RT-PCR. שיטה שלישית שמאפשרת הגברת  DNA שמקבלים מ RNA על ידי הוספת האנזים reverse transcriptase (לוקחים אותו מוירוס ה-HIV והוא הופך RNA ל-(DNA . שיטה זו מאפשרת חקר ביטוי גנים ברקמות או תאים שונים.

realtime PCR           שיטה שניה שמאפשרת מעקב בזמן אמת אחר קצב התרבות ה-DNA, מכאן ללמוד על קצב ביטוי הגן אותו הוא מקודד.

 

עריכת הסיכום

iw עִבְרִית
X