ביוטכנולוגיה

סיכום שיעור 11

Nasonov

Nasonov

פרטי הסיכום

קורס: ביוטכנולוגיה

מספר השיעור: 11

סיכום השיעור

  Fish Procedure

היא טכניקה ציטוגנטית שפותחה בתחילת שנות ה-80 של המאה העשרים המאפשרת לראות שינויים ברזולוציות גבוהות בגנום, כגון איתור ולוקליזציה של רצפי DNA ספציפים על כרומוזומים.

FISH משתמשת בפרובים פלואורסצנטיים אשר נקשרים רק לחלקים ספציפים בדנ”א אשר להם קומפלמנטריות גבוהה. ניתן לאתר את הפרובים הללו ואת מיקומם באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. לרוב נעזרים ב-FISH על מנת לאתר או לשלול אזורים ספציפים בדנ”א לצרכים לדוגמת ייעוץ גנטי או זיהוי של מין מסוים.

FISH יכול גם לשמש לזיהוי ואיתור של רצפי RNA מסוימים (לדוגמת mRNA, IncRNA, miRNA) בתאים, תאים של גידולים סרטניים ועוד. בהקשר הזה, הטכניקה יכולה לעזור בזיהוי של תבניות של ביטוי גנטי בתאים ורקמות ולסייע בייעוץ גנטי.

שימושים נפוצים: קביעת מספר העותקים של כל כרומוזום, אבחנה באברציות, מציאת דלישן (חסר) גדולים, אבחנה של אמפליפיקציות וחזרתיות מקטעים ספציפיים המקושרים לסרטן וקביעת עיתוי של שכפול גן ספציפי. ביצוע בדיקת קריוטיפ של צביעת כל כרומוזומים בתא.

Real Time PCR

תגובת שרשרת פולימראז בזמן אמת (PCR) בזמן אמת, המכונה גם תגובת שרשרת פולימראז כמותית (qPCR), היא טכניקת מעבדה של ביולוגיה מולקולרית המבוססת על תגובת שרשרת פולימראז (PCR). הוא עוקב אחר ההגברה של מולקולת DNA ממוקדת במהלך ה- PCR (כלומר, בזמן אמת), לא בסוף שלה, כמו ב- PCR קונבנציונאלי. ניתן להשתמש ב- PCR בזמן אמת כמותית (PCR כמותי בזמן אמת) ובמחצית הכמותית (כלומר, מעל / מתחת לכמות מסוימת של מולקולות DNA) (PCR כמותי למחצה בזמן אמת).

Digital PCR

PCR דיגיטלי (dPCR) מספק כימות מדויק ומוחלט של חומצות גרעין ללא עקומה סטנדרטית וללא תלות ביעילות ההגברה.

 

PCR דיגיטלי רגיש לאולטראס; לכן, מתאים לבדיקת גרסאות אלליות ומטרות של שפע נמוך הנמצאות מתחת לגבול הרגישות של qPCR. זה גם מדויק מאוד, והוא כלי טוב יותר מ- qPCR כאשר נדרשת קביעה מדויקת של היחס בין מספר רצפי חומצות גרעין.

 

עריכת הסיכום

iw עִבְרִית
X