ביוטכנולוגיה

סיכום שיעור 11

עדינה לוי

עדינה לוי

פרטי הסיכום

קורס: ביוטכנולוגיה

מספר השיעור: 11

סיכום השיעור

FISH- פותחים את הנא בעזרת פולימראז ועושים היברידזציה בעזרת פרובים פלורסנטיים. מסתכלים במיקרוסקופ ורואים אם רואים את הצבעים הפלורסנטיים. ניתן להשתמש במס’ צבעים במקביל אך שיטה זו מוגבלת ל 3-5 צבעים בלבד מפני שיש זליגה באיזור הקריאה של הצבעים וניתן לקבל תוצאה שגויה.

PCR – הכפלה של דנ”א ע”י פריימרים ידועים מראש. זוהי טכנולוגיה טובה אך לא נותנת פירוט של ביטוי גני ברמת התא הבודד. גם בשיטה זו תיתכן תוצאה שגויה בשל זליגה כתוצאה מריבוי צבעים פלורוסנטיים

RT-PCR – אותו רעיון כמו PCR רק שניתן לבצע גם עם RNA וגם ניתן לדעת בצורה כמותית כמה ביטוי גני היה לי בדגימה.

Digital Pro PCR – מפיקים דנ”א מרקמה ועושים לו PCR וחותכים לחתיכות קטנות. כל חתיכה מכניסים לתוך אקסוזום. ייווצרו הרבה בועיות עם רצף רצוי מסויים. כל טיפה מקבל ציון וכך ניתן להגיע לכמות אבסולוטית ולא רק יחסית.

Microarray – מתבסס על שיטה של ריצוף סנגר, שמשמעו שלוקחים רקמה ושוברים את הדנא לחלקים קטנים של 100-300bp. שמים על זכוכית עם פרובים ידועים. מוסיפים נוקליאוטידים מסומנים בסמן פלורסנטית ומצלמים במיקרוסקופ. רואים צביעה של נוקליאוטידים. כל צבע מסמן נוקליאוטיד ובצילומים רבים ניתן לראות ריצוף של הגן כולו כך שסה”כ ניתן לראות את ביטוי הגן. החיסרון בשיטה זו היא שרמת ביטוי הגנים היא לא ברמת התא הבודד אלא ברמת הרקמה.

עריכת הסיכום

iw עִבְרִית
X