ביוטכנולוגיה

סיכום שיעור 12

Nasonov

Nasonov

פרטי הסיכום

קורס: ביוטכנולוגיה

מספר השיעור: 12

סיכום השיעור

מי הוא פאל ברג?

כחוקר צעיר פתר פול ברג כמה בעיות מרכזיות בכימיה מטבולית ואז המשיך לחקור את המנגנונים שבאמצעותם ה- DNA וה- RNA שולטים בסינתזת החלבון במערכות החיים. בשנת 1972, יחד עם עמיתים מאוניברסיטת סטנפורד, הוא סינתז את ה- DNA הרקומביננטי הראשון (r-DNA). בהמשך, הוא מסייע לקהילה הבינלאומית של חוקרי ה- r-DNA בפתרון הבעיות הפיזיות והאתיות שנגרמות על ידי תיאוריה מהפכנית זו.

מי הוא פרדריק סנגר?

הוא הציע מדו לרצף DNA

בגרסה הקלאסית של שיטת סנגר, אחד מגדילי ה- DNA הניתוח משמש תבנית לסינתזה של הגדיל המשלים על ידי האנזים DNA פולימראז. התגובה עם אותה מטריצה ​​מתבצעת בארבעה צינורות שונים, שכל אחד מהם מכיל:

 

פריימר – מולקולת DNA חד גדילית קטנה המשלימה לתחילת האזור שצריך לרצף. פריימר הוא הכרחי מכיוון שפולימרזות DNA אינן יכולות להתחיל בסינתזה של שרשרת “מהחלל הריק”, אלא רק מצמידות את הנוקלאוטיד הבא לקבוצת 3′-הידרוקסיל (OH) הקיימת כבר של הקודמת. הפריימר הוא אפוא “פריימר” לסינתזת DNA;

ארבעה deoxynucleotides סטנדרטיים (dATP, dGTP, dCTP ו- dTTP);

כמות קטנה (בריכוז של 1 ל -100) של אחד הדאוקסינוקליאוטידים שכותרתו רדיואקטיבית (דידו-סינוקלאוטיד) (לדוגמא, [32P] -dATP), שמשולבת ב- DNA במהלך הסינתזה ומאפשרת הדמיה של מוצרי התגובה לאחר מכן;

ל- Dideoxyribonucleotides (ddATP, ddGTP, ddCTP או ddTTP) אין קבוצת 3′-הידרוקסיל; לכן, לאחר הכללתם בשרשרת, סינתזה נוספת מסתיימת. לפיכך, בכל מבחנה נוצר סט של שברי DNA באורכים שונים, אשר מסתיימים באותו נוקלאוטיד (בהתאם לתוספת הדידו-סינוקליאוטיד). לאחר השלמת התגובה, תוכן הצינורות מופרד על ידי אלקטרופורזה בג’ל פוליאקרילאמיד בתנאי דנטורציה והג’לים עוברים אוטוגרפיה. התוצרים של ארבע התגובות יוצרים “סולם רצפים” המאפשר “לקרוא” את רצף הנוקליאוטידים של קטע DNA [2]

השיטה של ​​סנגר מאפשרת לך גם לקבוע את רצף הנוקליאוטידים של ה- RNA, אך תחילה יש “לשכתב” אותו בצורה של DNA באמצעות תעתיק הפוך.

 

עריכת הסיכום

iw עִבְרִית
X