טכנולוגיות מתקדמות

סיכום שיעור 14

Ruti

Ruti

פרטי הסיכום

קורס: טכנולוגיות מתקדמות

מספר השיעור: 14

סיכום השיעור

בס”ד

סיכום שיעור 14

חזרה למבחן:

  1. פקס- מזרימים אירועים מול לייזרים. נותן 3 פרמטרים:

FSC גודל- 180 מעלות מול הלייזר

SSC – מידת המורכבות. אוספים את שבירת האור ב- 90 מעלות.

פלואורסנציה- לא חובה. אפשר להוסיף כמה סמנים פלואורסנטים. כמה שהמכשיר מסוגל לברור.

ערעור בכחול- אמיסיה בירוק. הירוק מתפזר לכל ה- 360 מעלות אבל אנחנו אוספים ב- 90 מעלות. הירוק יגע במראה הדיכרואית יגע בפילטר ויאסף. הזרימה היא בתזמון מאוד מיוחד. בכל טיפה אמור להיות אירוע בודד. בפקס הכל יחסי, זה לא גודל אבסלוטי. קיימים מספר סוגי פקס-

  1. פקס רגיל- מבוסס על אלקטרוסטטיות, חזק ומהיר
  2. מיקרופלואידיות- המערכת יותר איטית, בטוחה לעבודה סטרילית
  3. פקס ספקטרלי- 32 PMT שונים על כל אורכי הגל 420-800 ננומטר ומקבלים את כל האקסיטציות מקבלים חתימה ספציפית של כל אורך גל.

ריצוף בטכנולוגיית אילומינה:

מתחילים ביצירת ספריה, מוסיפים את האדפטורים, חתיכות דנ”א ספציפיות. מקטעי הדנ”א ידבקו ל- flow cell בעזרת רצף האדפטור המתאים ל- P5 I- P7. אח”כ מתבצעת הכפלה. גדיל המקורי יורד,  האדפטור השני נקשר ל- P7. שבירה, וממשיכים בהכפלהומקבלים הרבה עותקים של רצף ה-F וה-R של אותו גן. איזור של  100bp שחוזר על עצמו. יש מיליונים של אותו רצף ואח”כ כשנוסף נוקלאוטיד אחד יש תאורה חזקה.

במערכת נקלט הצבע של כל מקום. אח”כ שוטפים, מוסיפים את הברקוד שמקשר למשל מאיזו דוגמא זה הגיע. כך מתקבלות מיליוני קריאות, יש הרבה מאוד reads של אותו גן, כשבכל פעם חתכו אותו במקום אחר, על איזור אחד יש 15-20 reads למשל.

לסיכום: שלב ראשון- הכנת ה- DNA.  אח”כ tagmantation – להוסיף תגים. חלק מהם יקשרו ל-flowcell  וחלק יסמנו איזה דנ”א שייך לאיזו דוגמא. א ואז עושים PCR. דנ”א אינדקס וגם רצף מסוים של קישור. אח”כ יש את ה- cluster generation  : ב- floe cell  יש 2 זוגות פריימרים. התגים המתאימים להם יקשרו זה לזה וכדי שיתקבל סיגנל חשוב שבאזור מסוים יהיו הרבה עותקים. זהו ריצוף תוך כדי סינתזה.

 

 

 

 

 

עריכת הסיכום

iw עִבְרִית
X